| 一种肝干细胞来源的肝脏类器官培养和分化方法 | |
吕东媛 ; 龙勉; 郑璐; 钟绍宇
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| 2024-05-03 | |
| Rights Holder | 中国科学院力学研究所 |
| Abstract | 本发明公开了一种肝干细胞来源的肝脏类器官培养和分化方法，所述方法包括如下步骤：S1：肝干细胞培养S11：配制基础培养基；S12：对所述肝干细胞进行接种，加入所述基础培养基进行培养、传代，得到特定数量用于类器官构建的肝干细胞；S2：细胞成球培养；S3：肝脏类器官的增殖培养；S4：肝脏类器官的分化、成熟S41：更换所述固‑液混合物中的培养基为P型分化培养基，完成第一阶段分化；S42：再次将培养基更换为M型分化培养基，完成第二阶段分化，得到成熟的肝脏类器官。发明实现对类器官球体松散问题的进一步解决，且分化得到的肝脏类器官具有较高的成熟度，具有肝脏特定的细胞组成、结构和生理功能。 |
| Application Date | 2023-07-13 |
| Application Number | CN202310858082.2 |
| Patent Number | CN116769699B |
| Claim | 1.一种肝干细胞来源的肝脏类器官培养和分化方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： S1：肝干细胞培养： S11：配制基础培养基； S12：对所述肝干细胞进行接种，加入所述基础培养基进行培养，隔天换液，80%汇合时进行传代，得到特定数量用于类器官构建的肝干细胞和培养液悬液； S13：对所述细胞和培养液悬液进行第一次离心，弃去上清取细胞沉淀； 所述肝干细胞为人肝干细胞系HepaRG； S2：细胞成球培养： S21：向所述细胞沉淀中依次加入所述基质胶、基础培养基，吹打均匀，得到含有单细胞的基质胶-培养基混合液； S22：将所述混合液按特定体积接种于培养板中置于37℃孵箱进行第一次孵育； S23：向孵育完成的所述混合液中加入所述基础培养基，进行第二次孵育，得到固-液混合物； 其中，所述固-液混合物中含有含肝脏类器官的基质胶半球； 所述基础培养基由Williams’E培养基、10% FBS以及1%双抗组成； 按照体积份数比，所述细胞液为10份、所述基础培养基为100份、所述基质胶为200份； 所述第一次孵育的时间满足25 min； 所述第二次孵育满足以下条件：时间为7d，隔天或隔两天换液； S3：肝脏类器官的增殖培养： S31：对所述固-液混合物进行第二次离心处理，弃去上清，得到固溶物； S32：向所述固溶物中加入等体积所述基质胶，混合均匀，重复步骤S22-S23，得到增殖后的所述固-液混合物； S4：肝脏类器官的分化、成熟： S41：更换所述固-液混合物中的培养基为P型分化培养基，完成第一阶段分化； S42：再次将培养基更换为M型分化培养基，完成第二阶段分化，得到成熟的肝脏类器官； 所述第一次离心满足以下条件：170×g 离心3 min； 所述第二次离心满足以下条件：170×g离心5min； 所述P型分化培养基由HCM培养基、20 ng/mL BMP2、20 ng/mL FGF4以及1% DMSO组成； 所述M型分化培养基由HCM培养基、1 ng/mL SB41542、20 ng/mL HGF、20 ng/mL OSM、100 nM地塞米松以及1% DMSO组成； 所述第一阶段分化满足以下条件：分化培养7d；所述第二阶段分化满足以下条件：分化培养7d-14d。 |
| Language | 中文 |
| Classification | 发明授权 |
| Status | 有效 |
| Note | 授权 |
| Country | 中国 |
| Agency | 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) |
| Document Type | 专利 |
| Identifier | http://dspace.imech.ac.cn/handle/311007/97401 |
| Collection | 微重力重点实验室 |
| Recommended Citation GB/T 7714 | 吕东媛,龙勉,郑璐,等. 一种肝干细胞来源的肝脏类器官培养和分化方法. CN116769699B[P]. 2024-05-03. |
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